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試験とサービス

無菌試験

PDF - Meeting USP/EP/CFR sterility testing requirements with a two media assay

無菌試験には、直接接種法、メンブレンフィルター法、直接転移法という主に3つの方法があります。

無菌試験では主に3つの方法が用いられます。

1. 直接接種法

直接接種法では、適切な培地を含有するチューブまたはボトルに検体を直接接種し、一定期間インキュベートします。直接接種法の利点は以下のとおりです。
 

• 容易にろ過することのできない原料の無菌試験の手段となります
• 静菌作用および静真菌作用（B＆F）試験実施時に産物の消費量が少なくなります

     2.  メンブレンフィルター法

メンブレンフィルター法では、メンブレンフィルターに検体を通過させます。このメンブレンフィルターは、汚染微生物を保持しながら液状の検体と阻害物質を通過させて試験系から除去できるようにデザインされています。検体がフィルターを通過後に、そのフィルターを適切な滅菌洗浄液で洗浄します。次にフィルターユニットに適切な滅菌洗浄液を接種し、一般に、直接接種法と同じ時間インキュベートします。メンブレンフィルター法の利点は以下のとおりです。

• 大量のサンプルを処理可能（最高500 mL）
• 適切な洗浄剤によりフィルター膜を洗浄することにより、微生物の増殖を抑制する阻害物質を除去

     3. 直接転移法

弊社は、直接転移法（direct transfer）のカスタムメードプロトコールをご提供いたします。一般に、直接転移法は、固体剤形、医療機器、軟膏、クリーム剤に用いられます。無菌ではない製造工程により製造された検体については、バイオバーデン（または微生物限度）試験を実施する必要があります。原材料の用途に応じて、滅菌していない検体を望ましくない生物の有無について評価する必要がしばしば生じます。望ましくない生物の評価については、微生物限度試験が推奨されます。

 

内毒素検出試験

• バイオリライアンス社のLAL試験では、アメーバ様溶解物を用いた凝集反応を利用して、エンドトキシンLPSを特異的に検出します。エンドトキシンLPSは、グラム陰性細菌の細胞外膜に局在するコンポーネントです。 
• 米国薬局方（USP）では、エンドトキシン検出に用いられるLAL法が2種類記載されています。そのうちの1つであるゲル化法は、LAL試薬がエンドトキシンにより凝集する作用を利用してエンドトキシンを定量します。凝集反応の酵素カスケードの構成要素であるセリンプロテアーゼにより、水溶性コアグロゲンが分解されて非水溶性タンパク質であるコアグリンが生成し、凝塊が形成されます。
• USPに掲載される2つ目の方法は光学的手法です。
• この比色法では、セリンプロテアーゼが比色基質として作用し、発色団が生成されます。この発色団の量を吸光度測定法により測定します。弊社では、ゲル化法および比色法のいずれかを用いた試験を行ないます。試験の感度は、各試験法のプロトコールを基礎にしています。 

 

バイオバーデン試験

• バイオバーデン試験の目的は、好気的条件下で増殖する可能性のある常温菌および真菌を定量的に計数すること、検出される可能性がある特定の微生物が存在しない、または発生数が少ないことを評価することです。
• 試験は、現行のUSP＜61＞および＜62＞、「Microbial Enumeration Tests」および「 Tests for Specified Microorganisms」の基準と同等以上の水準で行われています。

 

残留汚染試験

残留DNA量の測定に用います。汚染DNA量は定量法により測定する必要があります。弊社では、広範な宿主種、CHO細胞、マウス細胞、ヒト細胞、大腸菌、酵母、イヌ細胞、ピチア属、ベロ細胞についてQ-PCR技術を用いて残留DNA量を評価しています。この方法によりDNA量をフェムトグラム単位で検出することが可能であり、これはFDAおよびWHO勧告に従った試験となります。また、宿主細胞の残留タンパク質の定量も承ります。

 

最終製品に対し分析試験を行なうことも可能です。